FARE TESTİSİNDE VE LEYDİG HÜCRE HATLARINDA ENDOPLAZMİK RETİKULUM İLE İLİŞKİLİ PROTEİN YIKIMININ (ERAD) STEROİDOGENEZ İLE İLİŞKİSİNİN BELİRLENMESİ
Tez Türü: Doktora
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Ankara Yıldırım Beyazıt Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Temel Tıp Bilimleri, Türkiye
Tez Danışmanı: Sevil Çaylı
Tezin Onay Tarihi: 2020
Tezin Dili: Türkçe
Desteklendiği Program: TÜBİTAK 2244 Programı
Özet:
ERAD ve
steroidogenez ile yapılan son çalışmalarda ERAD’ın androjenlerce regüle
edildiği ortaya konulmuştur. Özellikle ERAD proteinlerden SVIP’in, ERAD
inhibitörü olduğu literatüre geçmiştir. Fakat bu zamana kadar ERAD
proteinlerinin steroidogenez basamaklarında yer alan proteinlerle etkileşimleri
ve ya onların ekspresyonlarını nasıl etkiledikleri konusunda bir çalışma
yapılmamıştır. Bu bilgiler ışığında tezimde fare testis dokusunda ve Leydig
hücrelerinde, ERAD proteinlerinin steroidogenez sürecindeki rollerine açıklık
getirmek amacı ile SVIP, p97/VCP, StAR, CYP17A1 ve 3β-HSD’nin ekspresyonları immünfloresan,
immünohistokimya, ko-immünopresipitasyon, Western blot, Gen Ekspresyonu Analizi/QRT- PCR ve ELISA yöntemleriyle analiz edilmiştir.
StAR’ın, CYP17A1’in ve 3β-HSD’nin, SVIP ve p97/VCP ile Leydig hücrelerinde kolokalize
olduğu belirlendi. MA10, TM3 ve HLC Leydig hücrelerinde SVIP siRNA’ler ve p97/VCP siRNA’ler ile
protein ekspresyonlarının baskılanması sonucunda CYP17A1, 3β-HSD ve StAR ekspresyonlarında azalma gözlenmiştir. İnsan
Leydig hücrelerinde SVIP siRNA ile
transfeksiyon ve hücrelerin hCG ile
muamelesi sonrasında SVIP protein
ekspresyonunda anlamlı artış gözlenirken, CYP17A1, 3β-HSD ve StAR ekspresyonlarında anlamlı bir değişiklik saptanmamıştır. p97/VCP siRNA ile transfeksiyon
ve hücrelerin hCG ile muamelesi
sonrasında ise p97/VCP, CYP17A1, 3β-HSD ve StAR protein ekspresyonlarında anlamlı bir değişiklik saptanmamıştır. Kontrol siRNA, SVIP siRNA ve p97/VCP siRNA ile
transfekte edilmiş İnsan Leydig hücrelerinde SVIP ve p97/VCP gen
ekspresyonlarında anlamlı düşüş gözlenirken, CYP17A1, 3β-HSD ve StAR gen ekspresyonlarında
anlamlı değişiklik gözlenmemiştir. p97/VCP proteini çöktürülen HLC Leydig hücrelerinde
StAR, CYP17A1 ve 3β-HSD ile bu proteinlerin p97/VCP ile etkileşimde oldukları
belirlenmiştir. İnsan Leydig hücrelerinde Kontrol siRNA, SVIP siRNA ve p97/VCP
siRNA ile transfekte edilmiş
hücre medyumlarındaki testosteron düzeyleri karşılaştırıldığında, SVIP siRNA ve
p97/VCP siRNA ile transfekte grupta testosteron düzeylerinde anlamlı derecede azalma
görülmüştür. SVIP siRNA ile transfeksiyon ve hCG ile muamele sonrası
testosteron düzeyleri SVIP siRNA ile transfekte grupla karşılaştırıldığında
anlamlı derecede artış belirlenmiştir.
Sonuç olarak
diyebiliriz ki; ERAD’a ait proteinlerden SVIP ve p97/VCP Leydig hücrelerinde steroidogenezi etkiler, SVIP ve ve p97/VCP testosteron sentez sürecinde
rol oynamaktadır.